空气微生物采样器

    (1)采样器的装配
    ①移去营养琼脂平板皿盖，将一个营养琼脂平板放置于采样器底座的3个圆柱支子上，将第六级圆盘小心盖在平板上，再将第二个营养琼脂平板放置于采样器底座的3个圆柱支子上。按照这样的方法，连续将所有6个平板装入采样器内，再小心将人口顶盖盖在第一级上。所有的平板在装人采样器内之前应当维持在室温状态。
    ②装配完毕后，将底座上的出口接头连接到真空泵或其他抽真空源上。
    (2)进行采样操作
    ①依据空气环境的类型和采样目的，采样时间选择在数分钟至30 mi n范围内某一数值为宜。使每一个样品都收集到足够的带菌粒子是很重要的，以便能够保证采样结果在统计学上具有显著性和代表性。然后每个平板上，菌落数超过300 CFU，会造成计数困难。采样时间也不宜超过30min，否则营养琼脂平板上的水分损失而影响细菌活性。
    ②按动真空泵开关到“ON”位置，采样工作开始，采样气流通过采样器。关闭真空泵开关，记录采样时间以及采样点的气温、大气压力和相对湿度。
    (3)样品保存  采样完毕后，从采样器中取出营养琼脂平板，盖上皿盖；做好记录，分别标出样品号和级别号，如l—1、1—2、1—3、…。
    (4)细菌培养  样品培养后，用标准细菌菌落计数器，计数每一个平板上的菌落数，也可以用¨阳性孑L计数方法”，计数平板上的菌落数，然后用平板上的菌落数的数值，在“400孔采样器阳性孔修正表”中查出对应的修正后的菌落数。
    (5)结果计算
    ①菌落总数。每次采样，将6个平板上的菌落数的总和除以空气采样体积，可求出每立方米(m³)空气中的菌落数，以CFU／m³报告结果。其中空气采样体积等于空气采样流量乘以采样时间。空气中的菌落数可用式(6—7)计算：
    C一1000(N1+N2+N3+N4+N5+N6)／28.3 t              (6—7)
    式中，C为空气中的菌落数，CFU／m³；Nl～N6分别为第一级至第六级平板上修正后的菌落数，CFU；2 8.3为空气采样流量，L／min；t为采样的时间，min。
    ②各级菌落数的比例。在六级安德森撞击采样器中，将第一级平板上的菌落数除以6个平板上的菌落数总和，可求出第一级平板上的菌落数所占的比例，用％表示，其余类推。
    (四)恒流撞击式采样器
    恒流撞击式空气微生物采样器，是根据我国室内空气微生物检测的实际状况，设计制作的一种两级多孔撞击式采样器。使用90 mm标准玻璃培养皿，符合空气细菌总数标准检验方法的要求，测定出每立方米空气中所含的细菌和真菌的菌落数，同时测定出空气中带菌的可吸人与非可吸人粒子的浓度。这种采样器具有采样灵敏度高、操作简便、装卸方便、寿命较长、噪声较低、自控恒流、自控关泵等优点。
    1．采样原理和仪器结构
    (1)采样原理  恒流撞击式空气微生物采样器的采样原理，与安德森撞击采样器一样，是依据微粒惯性撞击原理设计的。将空气中携带的活细菌和真菌粒子采集在半固态的营养培养基上，培养后计数，用每立方米空气中所含的微生物菌落数(CFU／m³)报告结果。
    恒流撞击式空气微生物采样器是两级采样器，第一级的喷孔直径必须比第二级的大，气体流速则比第二级的小。控制空气采样流量恒定在30 L／min。采样时，在采样器第一级的气体流速V0下，较大粒子就有足够大的惯性而做惯性运动，离开气流撞击在第一级琼脂表面上被收集下来；较小的未撞击的微粒随气流进人第二级被收集在营养琼脂平板上。由此，就能把带菌的可吸人和非可吸人微粒有效地分开。
    第一级采集空气中非可吸人粒子上携带的活细菌和真菌等微生物，第二级采集可吸人粒子上的微生物，分别给出每立方米空气中所含的细菌和真菌的菌落数(CFU／m³)。用这种采样器不仅反映出空气微生物污染水平，而且又可评价空气中携带微生物的可吸人与非可吸人粒子的分布状况及其潜在的致病危害程度。
    (2)采样器的结构  恒流撞击式空气微生物采样器包括两级撞击式采样器、流量控制系统、真空泵和智能双数显控制器等部件，恒流撞击式采样器的结构组成。恒流撞击式采样器空气采样流量为30L／min，两级撞击式采样器由铝合金底座、有200个圆形小喷孔的第一级和第二级圆盘、顶盖及3个带螺钉不锈钢固定杆组成。
    2．培养基及平板制备   
    (1)培养基制备  空气细菌测定的营养琼脂培养基成分和制备方法如下：蛋白胨10 g、牛肉浸膏3g、氯化钠5 g、琼脂15～20 g、蒸馏水l000 L混合后加热溶解，校正至pH 7.4，过滤分装，以20 mi n的时间采用l21℃高压灭菌。也可以根据用户要求采用其他培养基成分制备平板。
    (2)平板的制备  空气中细菌的测定所用平板的制备，按照《室内空气质量标准》(GB／Tl8883一2002)中附录D的方法，移取20 mL的45～50℃灭菌营养琼脂，加人90 cm无菌玻璃培养皿内。制备成琼脂平板，盖上皿盖。
    3．采样和测定步骤
    (1)采样时间和显示设定  在采样操作之前，首先需要设定采样时间长短及其显示方式。我国生产的恒流撞击式空气微生物采样器。多数配备智能双数显控制器，具有自控关泵的功能。在正常工作时，它能够显示采样时间和设定值，采样自动计时，当运行时间达到设定值，自动关闭真空泵，停止采样。
    (2)采样器的装配
    ①打开营养琼脂平板皿盖，将一个营养琼脂平板放置于底座的3个圆柱支子上。将第二级圆盘小心盖在底座上，将另一个营养琼脂平板放置于第二级圆盘上部的．3个圆柱支子上，小心盖上第一级．再小心盖上顶盖。将3个固定杆竖起，将螺钉对准顶盖上部环状槽，顺时针轻轻旋紧。
    ②将真空软管连接于底座的排气口接头上，另一端连接到真空泵进气口接头上。采样气流从顶盖上进气口的方向吸人采样器，然后从底座接头上的排气口指示的方向排出真空泵。
    (3)进行空气采样  按动复位键或重新接通电源，此时电源POW指示灯和输出OU T指示灯交替闪烁．表明采样开始。采样运行时间达到规定时间，OU T指示灯自动熄灭，真空泵自动关闭，停止采样。采样完毕后，记录采样时间、采样点气温、大气压力和相对湿度。
    (4)样品保存  将3个固定杆的螺钉反时针旋松离开顶盖环状槽，移去顶盖和第一级圆盘，取出第一级的营养琼脂平板．盖上皿盖。在皿盖上分别标出样品号和级别号，做好记录，例如标出1-1、1-2；2-1、2-2等。
    (5)细菌培养  为了预防冷凝水珠出现，将平板翻转倒置于培养箱内进行培养，测定在36±1℃下培养48 h的细菌数；真菌最佳培养温度在20～25℃；或者根据采样目的选择适当的温度培养。
    (6)样品培养后，用标准细菌菌落计数器．计数每一个平板上的菌落数，也可以用“阳性孔计数方法"，计数平板上的菌落数，然后用平板上的菌落数的数值，在“200孔采样器阳性孔修正表”中查出对应的修正后的菌落数。
    (7)结果计算
    ①菌落总数。每次采样，将6个平板上的菌落数的总和除以空气采样体积，可求出每立方米(m。)空气中的菌落数，以CFU／m³报告结果。其中空气采样体积等于空气采样流量乘以采样时间。空气中的菌落数可用式(6—8)计算：
    C一1000(N1+N2)／30t        (6-8)
    式中，C为空气中的菌落数，CFU／m³；Nl、N2分别为第一级舌第二级平板上修正后的菌落数，CFU；3 0为空气采样流量，L／min；t为采样的时间，mi n。
    ②可吸人菌落数的比例。在六级安德森撞击采样器中，将第一级平板上的菌落数除以2个平板上的菌落数总和，可求出空气中可吸人粒子上的微生物所占的比例，用％表示。

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